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知識分享

  • RNA實驗操作注意事項
  • RNA抽取純化是分子生物學研究的基本工作之一,但是由於RNA分解酵素的廣泛存在及其難以消滅的頑強特性,使得RNA的抽取純化和後續工作極為困難。雖然3-Zol試劑和各類RNA抽取純化套件的廣泛應用使得RNA抽取和純化不再特別困難,但是涉及RNA的工作仍然是分子分生物學研究中最讓人頭痛的一個項目。為了確保RNA的研究工作能夠成功,請您參考下列注意事項,相信它能幫助您解決常見的問題。

    歸根究底,RNA工作的主要問題是防止RNA分解酵素的污染。RNA分解酵素無處不在,在實驗操作的任何一步,任何偶然的疏忽或不當操作都有可能造成RNA分解酵素污染,從而導致整個實驗失敗。因此,嚴格控制實驗條件,避免任何可能的污染是保証實驗成功的關鍵。因此必須做到以下幾點:

    1.如果可能,實驗室應專門闢出RNA操作區,離心機、分注器、試劑等均應專用。RNA操作區應保持清潔,並定期進行消毒。

    2.操作過程中應自始至終佩戴拋棄式橡膠或乳膠手套,並經常更換,以避免將手、臂上的細菌和真菌以及人體自身分泌的RNA分解酵素帶入試管或污染用具。盡量避免使用拋棄式塑膠手套。塑膠手套不但常常造成不便,且塑膠手套的多出部分常常在器具上遭RNA分解酵素污染處和未污染處間傳遞分解酵素,擴大污染。

    3.盡量使用拋棄式塑膠製品,盡量避免共用器具如濾紙、吸管尖、離心管等,以防止交叉污染。例如,部分RNA的研究經常需要使用RNase H、T1等,在操作過程中極有可能造成分注器、離心機等的污染。而這些污染了的器具正是RNA實驗的大敵。

    4.配製溶液用的酒精,異丙醇、Tris等應採用未開封的新品。

    5.拋棄式塑膠製品部分,建議使用出廠前已經滅菌的吸管尖和離心管。多數廠商供應的無菌塑膠製品很少有RNA分解酵素污染,買來後可直接用於RNA操作。許多研究者用DEPC等處理的塑膠製品,往往由於二次污染而帶有RNA分解酵素,從而導致實驗失敗。

    6.所有玻璃製品都必須在150℃烘烤4小時。所有舊塑膠製品都必須用0.5M的NaOH處理10分鐘,並用DEPC-H2O徹底沖洗後滅菌。無法用DEPC處理的用具可以用氯仿擦拭若干次,這樣通常可以消除RNA分解酵素的活性。