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高準度耐熱性核酸聚合脢

Pfu DNA Polymerase

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贈品表:
1. dNTP (1mL, A, T, G, C each at 10mM,原價1,600元)
2. 100bp DNA Ladder Marker一支 (50ug,100次,原價1,000元)
3. 1Kb DNA Ladder Marker一支 (50ug,100次,原價1,000元)
4. Agarose LE (50g,原價1,470元)
5. L.B. Broth (500g,原價1,470元)

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產品資料

產品代碼: 102-9012-90-2
簡介: Pfu核酸聚合脢是從高溫嗜熱菌Pyrococcus furiosis分離出的高準度(High Fidelity)耐熱性核酸聚合脢。Pfu核酸聚合脢能校正DNA在PCR過程中產生的錯誤,而傳統的耐熱性核酸聚合脢TaqTth,及它們的相關產品如AmpilTaqKlenTaq等,都無法更正錯誤。耐熱性核酸聚合脢VentDeep VentTliPwoPfuUlTma等都具有校正功能(Proof reading),但Pfu核酸聚合脢是目前已發現的所有耐熱性核酸聚合脢中擴增DNA時錯誤率(Error Rate)最低的產品。Pfu之錯誤率比Taq及相關產品低10倍,比VentPwo低2-4倍,比UlTma低30倍。如將其它的耐熱性核酸聚合脢與Pfu核酸聚合脢混合使用可以降低產品的錯誤率,但準確度不如單獨使用Pfu核酸聚合脢。在基因選殖、基因表達及基因突變分析等分子生物實驗操作中,由於對DNA擴增產物的正確率要求較高,常常希望萬無一失,Pfu是公認取代Taq的最佳選擇。
濃度: 5U/uL
錯誤率: 10-6
10X反應液: 100mM KCl
160mM (NH4)2SO4
20mM MgSO4
200mM Tris-HCl(pH8.8)
1% Trition X-100
1mg/mL BSA
品質管制:
1. 無外來核酸脢活性。
2. SDS-PAGE純度大於95%。
3. 以PCR方法檢測無外來DNA。
4. 能自100ng的Lambda模板中特異性擴增出1Kb及2Kb之單套(Single Copy)基因。
保存液: 50mM Tris-HCl(pH8.2)
0.1mM EDTA
0.1% Tween20
0.1% NP-40
1mM DTT
50% Glycerol
保存條件: -20℃
參考資料: Pfu核酸聚合脢來源為高溫嗜熱菌Pyrococcus furiosis,分子量為90KD。以Pfu核酸聚合脢擴增得到的PCR產物兩端為平端(Blunt End),3'端無A鹼基突出。Pfu核酸聚合脢有3'端向5'端之外切脢活性(錯誤校正功能),無5'端向3'端之外切脢活性。聚合時延伸速度為每分鐘600鹼基,最佳溫度為65-75℃,dNTP工作濃度為100-300uM,最佳鎂離子濃度為2-3mM,最佳pH為8.1-9.1。
使用方法: Pfu的使用方法與Taq相同,50uL標準反應液中約需Pfu核酸聚合脢2.5U左右。
注意事項:
1. Pfu擴增效率通常比Taq為低,主因為Pfu核酸聚合脢具有3'端向5'端之外切脢活性(錯誤校正功能),並非Pfu核酸聚合脢品質不穩定。Pfu在擴增2Kb以下的DNA片段時,與Taq差別不大。
2. 10X反應液中已含有鎂離子,使用該反應液能確保擴增產物的正確性。提高反應液的pH與鎂離子濃度能提高擴增的產率,但產物的正確性將會下降。一般不建議以Taq反應液代替Pfu反應液進行高準度DNA擴增反應。
3. 使用Pfu核酸聚合脢進行擴增反應時,引子純度要求較高,長度必須大於18個鹼基,Tm值介於55至80℃間,引子濃度則在0.1至0.5uM之間,比Taq略高。Pfu核酸聚合脢具有3'端向5'端之外切脢活性(錯誤校正功能),可能會分解引子,特別是在溶液中沒有dNTP時。因此,Pfu核酸聚合脢必須最後加入反應體系中,並於加入後立即進行擴增反應。
4. Pfu的熱穩定性比Taq略高,對於GC含量高的模版,開鏈溫度提高到98℃亦不會影響Pfu核酸聚合脢的活性。
5. Pfu核酸聚合脢擴增之PCR產物兩端為平端(Blunt End),無3'端A鹼基突出,不能直接進行TA選殖,必須使用加A(A-Tailing)套件處理後,方可進行TA選殖。

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中華民國97年10月03日更新